微囊藻毒素，MC，Empore，47mm固相萃取膜
前言：
微囊藻毒素（Microcystin，MC）是一類具有生物活性的，自然環境中廣泛分布的肝毒素。它對人體蛋白磷酸酶1 和蛋白磷酸酶2A 具有抑制作用，與腫瘤促進作用有直接關系。中國生活飲用水衛生標準（GB/T 5749-2006），將飲用水中微囊藻毒素含量限制為1.0μg/L，該標準的實施對水源水的質量提出了更高的要求[1]。
實驗中，采用1升水樣通過47mm的Empore™ C18固相萃取膜片（貨號：98-0604-0217-3）處理，并用含0.1%三氟乙酸的甲醇溶液洗脫。然后通過HPLC對提取物進行定量[2]。
1， 實驗過程
所有試劑均為分析純或更高。
微囊藻毒素-LR標準物質（農業部環境保護科研監測所，20μg/mL，溶劑：甲醇）；
EmporeTM 固相萃取膜：C18，47mm，購自美國CDS公司（貨號：98-0604-0217-3）；
甲醇（色譜純， Fisher Chemical）
三氟乙酸（分析純，天津市福晨化學試劑廠）
磷酸二氫鉀（分析純，北京化學試劑公司）
磷酸（分析純，國藥集團化學試劑公司）
純凈水，產自Milli-Q® EQ 7000系統，美國密理博Millipore公司
磷酸二氫鉀溶液（0.05mol/L）：稱取6.8g磷酸二氫鉀，用水溶解，定容至1000.0mL
磷酸鹽緩沖液：用20%（體積分數）磷酸溶液將磷酸二氫鉀溶液調至pH到3
0.1%三氟乙酸-甲醇溶液：用甲醇將0.1mL三氟乙酸定容至100.0mL
Sepaths UP 柱膜通用全自動固相萃取系統，北京3377官網儀器股份有限公司；
高效液相色譜儀：LC600 二元高壓梯度高效液相色譜，北京3377官網儀器股份有限公司。
微囊藻毒素-LR工作液：將20μg/mL微囊藻毒素-LR標準物質用甲醇稀釋至濃度為2μg/mL；
1.3 實驗
1L 自來水中加入100mg硫代硫酸鈉，再加入200μL的 2μg/mL 微囊藻毒素-LR標準工作液，樣品的加標濃度為400ng/L。超聲30min，待萃取。使用同一批EmporeTM 固相萃取膜(C18，47mm)對每個樣品進行四次重復制備。
將樣品及EmporeTM 固相萃取膜（C18，47mm）加入Sepaths UP 柱膜通用全自動固相萃取系統，并按照圖1所示的方法進行Sepaths UP方法編輯并進行固相萃取富集，收集洗脫液。
對洗脫液進行氮吹濃縮，當收集液濃縮到近干時，加入流動相定容到1.0mL，待HPLC檢測。
圖1 微囊藻毒素-LR SPE富集方法
色譜柱：LabParts C18反相柱，5μm，4.6×250mm；
波長：238nm；
流速：1mL/min；
柱溫：35℃；
進樣量：20μL；
流動相：甲醇：磷酸鹽緩沖溶液= 65：35
2, 實驗結果
圖2，微囊藻毒素-LR標準工作液色譜圖（0.4ppm）
3，結果與討論
本次實驗展示使用EmporeTM 固相萃取膜(C18，47mm，固相萃取柱，貨號：98-0604-0217-3)對自來水中微囊藻毒素-LR進行富集提取的方法。實驗中，樣品經固相萃取凈化、濃縮等前處理步驟后，經HPLC分析得到微囊藻毒素-LR的加標回收率達80.1%~86.4%，結果較好。四次重復實驗RSD=3.1%，通道間的平行性良好。實驗表明，EmporeTM 固相萃取膜(C18，47mm，固相萃取柱，貨號：98-0604-0217-3)適用于消微囊藻毒素-LR的萃取凈化。
4，參考文獻
[1] GB/T 5749-2006 生活飲用水衛生標準
[2]GB/T 20466-2006 水中微囊藻毒素的測定
圖 3 加標樣品色譜圖
表1 加標回收率結果
| 標樣 | 4 組平行樣回收率，% | 平均值，% | RSD，% | |||
| 1 | 2 | 3 | 4 | |||
| 微囊藻毒素-LR | 80.1 | 82.7 | 86.4 | 83.3 | 83.1 | 3.1 |
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